高效液相色谱（HPLC）的原理与正反模式

高效液相色谱（HPLC）是什么？

高效液相色谱（HPLC）是分析化学领域中的一项核心技术。常规的HPLC分析广泛应用于药物研发、质量控制（QC）与质量保证（QA），以及食品和环境检测等多个领域的实验室中。此外，也存在一些专门化的液相色谱技术，如制备型HPLC、凝胶渗透色谱（GPC）以及超高效液相色谱（UHPLC）。实际应用中具体选择何种技术，取决于待测样品的性质与需要分析的含量。

高效液相色谱（HPLC）的分离过程包括将少量液体样品注入填充有细小颗粒固定相（通常粒径为3–5μm）的HPLC色谱柱中。通过高压泵输送的流动相推动样品中各组分在色谱柱内迁移，实现高效分离。在质量控制（QC）与质量保证（QA）实验室的常规分析中，所使用的液相流动相典型流速范围为1–2mL/min。

高效液相色谱（HPLC）的分离原理

高效液相色谱（HPLC）的分离原理主要基于样品分子与色谱柱中填料颗粒之间发生的多种化学作用与物理吸附。这些相互作用直接决定了HPLC色谱柱的选择性。目前存在种类丰富的HPLC色谱柱和填料类型，以适应日益拓展的应用需求。借助化学键合相所具有的不同选择性，可实现测试样品中各组分的有效分离。在此基础上，当这些被分离的组分随流动相离开色谱柱后，会由HPLC检测器进行定性与定量检测。

高效液相色谱（HPLC）的正相和反相模式

在高效液相色谱（HPLC）中，分离机制基于分子极性的差异。根据“相似相溶”原理，极性相近的分子间更容易发生吸附或相互作用；反之，极性差异大的分子间作用力较弱，甚至可能出现排斥。

在正相色谱（NP-HPLC）模式下，固定相为极性填料，流动相为非极性溶剂。此时，非极性物质因与固定相作用较弱而洗脱较早，极性物质则因较强保留而洗脱时间较长。

而在反相色谱（RP-HPLC）——目前HPLC分析中最常用的分离模式中，固定相为非极性，流动相为极性溶剂。极性物质与固定相相互作用弱，因此优先被洗脱；而非极性组分由于在固定相上有更强的保留，其在色谱柱中的保留时间显著延长。

• 上一个：

  什么是液质联用系统（LC/MS）？

• 下一个：

  看得见的干净，看不见的风险｜季铵盐的家庭暴露路径被重新定义