药物分析排忧解难系列 | 如何应对极端比例和缓梯度

做液相的朋友大概率都有过以下经历：保留时间飘，心率往上飙，保留时间跑，两腿要发抖，担了惊受了怕，咱还得知道液相的保留时间为啥会飘？

如果仪器状态正常，操作也没问题，那大概率就是因为方法本身存在一定的挑战性。这种挑战，通常来自于流动相梯度比例或者变化的极限挑战，比如采用某一相比例低于 5% 的方法，或者是长时间内变化百分之的梯度，这些都属于极端条件。近年来，随着很多检测品种或项目相关法规要求的更新，采用此类极端比例的方法日益增多，这就导致了咱的心脏频繁被挑战，上个班还能体验心律失常，一份班受了两份罪。

对于这种极端比例和缓梯度，可以举个例子，比如 25 版药典当中一款名为碘海醇的品种。

如图为它在有关物质检测项目下的液相色谱梯度条件：

起始 1% 有机相，一个小时梯度变化 12%。若仪器稳定性稍有不足，保留时间便可能出现显著漂移，影响分析结果的可靠性。这种极端情况，已经远远超出一般仪器可以稳定运行的极限。

当常规的仪器配置难以应对此类情况，在实际操作中，经验丰富的实验人员通常会采取以下策略：把梯度起始比例和终止比例的流动相分别手动配成 A、B 两相，也就是 1% 乙腈作为 A，13% 乙腈作为 B，然后把仪器方法设置成从 0% 走到 100% 的线性梯度。通过这种方式，既避免了极端比例，也不会被缓慢的梯度变化困扰，从而有效提升实验效果。

然而，该方法虽然解决了仪器方面的挑战，却又引入了人为操作的不确定性：手工配制流动相难以保证批次间完全一致，而“配液高手”也不可能永远在岗。临时对策虽能应急，却并非长久之计。

真正的解决方案仍需依靠技术进步。如今，已有新技术能够从根本上应对极端比例与缓梯度带来的挑战——Agilent Infinity III 四元泵，针对上述难题提供了稳定、可靠的支持（详情参见下图）。

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